Вазопрессин-зависимая водная проницаемость базолатеральной мембраны собирательной трубки почки крысы в постнатальном онтогенезе

Аннотация

Антидиуретический гормон аргинин-вазопрессин (AVP) регулирует реабсорбцию воды главными клетками собирательных трубок почки крысы. Хорошо известно, что незрелая почка в период молочного вскармливания нечувствительна к вазопрессину. Функциональный ответ на этот гормон впервые появляется в период вининга, возможно, благодаря созреванию внутриклеточных механизмов трансдукции гормонального сигнала. Цель настоящей работы состояла в исследовании эффекта агониста V2-рецептора dDAVP на водную проницаемость базолатеральной мембраны клеток наружного слоя мозгового вещества (OMCD) в постнатальном онтогенезе. Проницаемость базолатеральной мембраны клеток измерялась на микродиссектированных канальцах, апикальная мембрана которых была блокирована маслом, введенным в просвет. Осмотическая водная проницаемость (Pf) оценивалась при помощи измерения скорости набухания клеток после быстрой смены гиперосмотической омывающей жидкости на изоосмотическую (c 600 мосм до 300 мосм) в контрольных условиях и после инкубации с dDAVP (10-8 M). Водная проницаемость OMCD 10- и 22-дневных крысят в контрольных условиях была достоверно выше, чем у взрослых животных. dDAVP стимулировал достоверное повышение этого параметра у 22-дневных крысят (Pf = 125 ± 4,85; Pf = 174 ± 8,2 мкмоль/с, p < 0,001) и взрослых крыс (Pf = 100,5 ± 7,38; Pf = 178,8 ± 9,54 мкмоль/с, p < 0,001). Осмотическая водная проницаемость базолатеральной мембраны клеток OMCD у 10-дневных крысят не зависела от dDAVP (Pf = 172,5 ± 23,8; Pf = 164,8 ± 34 мкмоль/с). Ртуть (1 ммоль HgCl2) резко снижала Pf базолатеральной мембраны OMCD. Отмывка ртути восстанавливала водную проницаемость до контрольного уровня. Для исследования механизма, лежащего в основе наблюдаемых изменений, мы оценивали методом полуколичественного RT-PCR содержание мРНК - ключевого элемента системы трансдукции сигнала AVP - V2-рецептора и аквапоринов 2, 3 и 4. Хорошо известно, что связывание AVP с V2-рецепторами в главных клетках собирательных трубок вызывает перемещение водных каналов AQP2 из депо во внутриклеточных везикулах в апикальную плазматическую мембрану. Мы наблюдали постепенное увеличение генной экспрессии AQP2 и рецептора V2 во время постнатального онтогенеза. Генная экспрессия водных каналов базолатеральной мембраны AQP3 и AQP4 оставалась неизменной в течение этого периода. Таким образом, водная проницаемость базолатеральной мембраны клеток OMCD у крыс может стимулироваться после 22-го дня постнатальной жизни. Нестимулированная водная проницаемость базолатеральной мембраны OMCD постепенно уменьшалась во время постнатального развития, в то время как генная экспрессия AQP3 и AQP4 оставалась неизменной. Механизм этого снижения предстоит выяснить в дальнейших исследованиях.