Ультраструктурный и иммуноцитохимический анализ цитоплазматических источников аквапоринов в гранулярных клетках мочевого пузыря лягушки

Abstract

Эпителий мочевого пузыря амфибий относится к типу вазопрессин-чувствительных непроницаемых эпителиев. Значительное увеличение его водной проницаемости при добавлении антидиуретического гормона (АДГ) - вазотоцина - сопровождается перестройками структуры апикальной мембраны гранулярных клеток, транспортирующих воду. С помощью метода замораживания-скалывания было показано, что на Р-поверхности скола апикальной мембраны появляются агрегаты внутримембранных частиц (ВМЧ), отсутствующие при исходно низкой водной проницаемости эпителия и представляющие собой мембранные домены, обладающие высокой водной проницаемостью и содержащие белки водных каналов - аквапорины. В настоящее время отсутствует единая точка зрения, касающаяся цитоплазматических источников этих белков. Полученные нами данные позволяют предположить, что источниками аквапоринов являются мембраны специфических гранул, сливающихся с апикальной мембраной при стимуляции водного транспорта. Для идентификации мембран гранул с высокой водной проницаемостью, соответствующей участкам апикальной мембраны, занятой агрегатами ВМЧ, было проведено иммуноэлектронно-микроскопическое изучение локализации аквапоринов в исследуемых клетках. В качестве первых антител были использованы моноклональные антитела к аквапоринам апикальной мембраны эпителиальных клеток собирательных трубок почки млекопитающих (AQP2), являющиеся так же, как и аквапорины апикальной мембраны гранулярных клеток мочевого пузыря лягушки, вазопрессин-регулируемыми. В качестве вторых антител использовались иммуноглобулины кролика, иммунизированного иммуноглобулинами мыши, конъюгированные с коллоидным золотом. Несмотря на низкую интенсивность иммунной реакции, локализация метки всегда носила специфический характер. Как правило, частицы золота выявлялись только на апикальной мембране гранулярных клеток и на мембранах гранул. Полученные данные подтверждают высказанную нами ранее гипотезу о доставке и встраивании аквапоринов в апикальную мембрану исследуемых клеток из мембран некоторого пула специфических гранул. Работа поддержана грантом РФФИ № 00-04-49480.